| | | 圖1. 基于PicoPLEX Single Cell WGA Kit v3的CNV檢測 | | 以來自不同細(xì)胞系(GM22601、GM05067和GM12878)的單細(xì)胞起始,使用PicoPLEX Single Cell WGA Kit v3擴增基因組。之后取1ng的擴增產(chǎn)物,使用Illumina Nextera XT Kit制備文庫,并在Illumina MiSeq(PE 75)進(jìn)行測序。對Fastq文件去除接頭序列信息后,與human genome assembly GRCh37進(jìn)行比對。只分析常染色體。對于這兩個panels,校準(zhǔn)歸一化至100萬reads,使用bedtools 2.25.0計算每1 Mb的 bin的reads數(shù)。使用Integrative Genomics Viewer (IGV)繪制bin counts的log2 ratio (Sample/Reference)。PicoPLEX Single Cell WGA Kit v3還顯示了可以高品質(zhì)的進(jìn)行染色體異倍性分析。 | | | 圖2. PicoPLEX Single Cell WGA Kit v3的全基因組覆蓋范圍的重現(xiàn)性高 | | 以GM12878的單細(xì)胞樣本起始(一式兩份),分別使用PicoPLEX WGA v3,A公司試劑盒和B公司試劑盒擴增基因組。之后取1ng的擴增產(chǎn)物,使用Illumina Nextera XT Kit制備文庫,并在MiSeq(PE 75)進(jìn)行測序。然后與human genome assembly GRCh37進(jìn)行比對,歸一化至1M reads (0.5M paired-end reads)后,使用bedtools 2.25.0計算每個1 Mb的bin的reads數(shù)。對這兩個單細(xì)胞文庫的每個窗口的total read進(jìn)行繪制,計算Pearson和Spearman相關(guān)性并在每個圖中標(biāo)明。 | Panel A. 包含異常值的樣本。*由于不同技術(shù)存在不同的偏差,沒有排除相關(guān)點,所以圖表的比例不同。 Panel B. 排除異常值的樣本。與A公司和B公司試劑盒相比,PicoPLEX WGA v3具有更高的重現(xiàn)性和覆蓋度。 |
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