神經(jīng)干細胞基的使用注意事項
1.在配制*培養(yǎng)基前,請把間充質干細胞無動物源生長添加劑(MSCGS-xf)、青霉素-鏈霉素(P/S)放到2-8℃冰箱過夜解凍,然后加入到基礎培養(yǎng)基中。
2.在使用*培養(yǎng)基前,需要把培養(yǎng)基放到37℃恒溫水浴中預熱,注意溫度不要超過37℃。
3.請把配制好的*培養(yǎng)基放在4℃冰箱避光保存,并盡量在一個月內使用完。若培養(yǎng)基要分幾次使用,請將間充質干細胞無動物源生長添加劑(MSCGS-xf)、青霉素-鏈霉素 (P/S)解凍按用量分裝后保存。
4.可不包被培養(yǎng)瓶,但配合貼壁材料Attachin(貨號BW110028)使用效果更佳。
免疫細胞化學染色具體方法為:
(1) 0.05M PBS漂洗 10min×3次
(2) 0.3%H2O2/0.05M PBS室溫 30min
(3) 0.3%Triton-100/0.05M PBS 37 ℃,15min
(4) 0.05M PBS漂洗 10min×3次
(5) 5%羊血清/0.05M PBS 37 ℃,15min
(6) I抗(2%羊血清/0.05M PBS配) 4℃,48h
(7) 0.05M PBS漂洗 10min×3次
(8) II抗(2%羊血清/0.05M PBS配,1:200) 37 ℃,1.5h
(9) 0.05M PBS漂洗 10min×3次
(10) AB復合物(0.05M PBS配,1:100) 37 ℃,1.5h
(11) 0.05M PBS漂洗 10min×3次
(12) Tris-HCl緩沖液 37 ℃,15min
(13) DAB顯色 20min
(14) 蒸餾水漂洗 10min×3次