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SFM無(wú)血清培養(yǎng)基的使用注意事項(xiàng)
點(diǎn)擊次數(shù):1070 更新時(shí)間:2020-05-21
SFM無(wú)血清培養(yǎng)基是在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的,與傳統(tǒng)的培養(yǎng)基相比,既能滿足細(xì)胞在體外長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)的要求,又能避免動(dòng)物血清所帶來(lái)的不利因素。SFM無(wú)血清培養(yǎng)基被廣泛的應(yīng)用于培養(yǎng)哺乳動(dòng)物和無(wú)脊椎動(dòng)物細(xì)胞以制備單克隆抗體,病毒抗原和重組蛋白等。
大多數(shù)的無(wú)血清培養(yǎng)基含有向細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)離子的轉(zhuǎn)鐵蛋白和調(diào)節(jié)葡萄糖攝取量的胰島素,以及一些蛋白質(zhì)和清蛋白,纖維蛋白,胎球蛋白等,這些蛋白在細(xì)胞培養(yǎng)中發(fā)揮各種不同的功能,如提供細(xì)胞貼壁所需的基質(zhì),抗生物反應(yīng)器剪切力,作為脂質(zhì)和其他生長(zhǎng)分化因子的載體等。
那么接下來(lái)就讓我們?cè)賮?lái)了解一下SFM無(wú)血清培養(yǎng)基的使用注意事項(xiàng)有哪些吧。
建議備份前一次混合培養(yǎng)的培養(yǎng)物,直到每一次細(xì)胞適應(yīng)了新的混合培養(yǎng)基。每一次減少血清前,可能需要在SFM/有血清混合培養(yǎng)基中進(jìn)行幾次傳代。
在適應(yīng)過(guò)程中,不要讓細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)度。這將增加選擇亞群的可能性。需要注意,與有血清培養(yǎng)基相比,大部分SFM包含非常少的蛋白質(zhì),因而更易于受外界因素的影響。
細(xì)胞培養(yǎng)適應(yīng)替代血清:許多細(xì)胞利用連續(xù)適應(yīng)方法能很好的適應(yīng),用包含F(xiàn)BS的的培養(yǎng)基和包含有替代血清的培養(yǎng)基1∶1(v∶v)的混合培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞。通過(guò)下列的混合培養(yǎng)基的方式,連續(xù)幾代減少當(dāng)前培養(yǎng)基的量:1∶2,1∶4,1∶16和100%替代培養(yǎng)基。每次適應(yīng)改變血清比例時(shí),傳代細(xì)胞2到3次。
培養(yǎng)可以直接從FBS轉(zhuǎn)換到替代血清。一開(kāi)始就使用相同于FBS的濃度的替代物或血清,生長(zhǎng)的延遲可能會(huì)發(fā)生,4允許進(jìn)行2到3次的傳代,使生長(zhǎng)率恢復(fù)到以前的水平。
特別需要強(qiáng)調(diào)的是:配制無(wú)血清培養(yǎng)液必須使用高質(zhì)量的水,如石英玻璃蒸餾器經(jīng)三次蒸餾或超純水凈化裝置制備的水。因?yàn)闊o(wú)血清培養(yǎng)基缺乏了血清中天然成分中和毒素、保護(hù)細(xì)胞的大分子,既便水中的有毒物質(zhì)含量甚微,也可能對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生致死性損害。這是無(wú)血清培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵因素之一。